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本制品是最新一代的快速高效封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本制品配制在含有适当浓度Tween-20的PBS(PBSTw)中。


本制品与BSA及国外同类产品的封闭效果对比参见图1。在相同样品和实验条件下，仅封闭液及封闭时间存在如下图所示的差异时，百奥莱博的FastBlock封闭液封闭后的整体背景明显低于BSA封闭后的背景，而且目的条带亮度明显高于国外同类品牌产品。

图1．FastBlock免疫封闭液与BSA及国外同类产品的封闭效果比较。每组实验从左到右依次为：5μL蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液。请注意对于Antibody A，FastBlock免疫封闭液比BSA和国外同类产品具有更低的背景，并且和国外同类产品相比信号明显更强。对于Antibody B，FastBlock免疫封闭液比BSA具有更低的背景，和国外同类产品相比信号明显更强。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

• FastBlock免疫封闭液快速高效。
  封闭时间通常仅需5～15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考图1)。
  
• FastBlock免疫封闭液封闭后背景极低。
  本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。
  
• FastBlock免疫封闭液兼容性好。
  兼容辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)和生物素标记的二抗。本制品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本制品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。
  
• FastBlock免疫封闭液使用便捷。
  本制品配制在PBSTw中，可以直接用于封闭、一抗或二抗的稀释等相关实验。

• 本制品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2～3次。回收的封闭液请勿与未使用过的封闭液混合。
  
• 通常本制品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5～15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30～60分钟。此外，如有特殊需要，也完全可以4℃封闭过夜。
  
• 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
  
• 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
  
• PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异常背景。

• Western Blot中膜的封闭
  
  • 完成转膜后，用Western洗涤液洗涤蛋白膜1～2分钟。
    
  • 根据膜的大小，在平皿或者其它适当容器中倒入一定体积的FastBlock免疫封闭液(PBSTw)，确保封闭液后续能充分覆盖膜即可。对于常规的western，一张约6.6×8.5cm的膜推荐使用约10mL左右的封闭液。
    
  • 用平头镊夹住膜的一角，将膜放置在FastBlock免疫封闭液(PBSTw)中，使封闭液完全浸没膜，置于水平摇床上封闭约10分钟(通常5～15分钟均可；经多种抗体的测试封闭10分钟的效果很多时候会显著优于常规的BSA封闭1小时的效果)。
    
  • 封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续实验。
  
  
• IF、IHC等实验的封闭
  按照相关实验步骤，直接用FastBlock免疫封闭液(PBSTw)替换传统封闭液即可，一般封闭时间可以缩短至10分钟(在百奥莱博测试过的多个一抗中，封闭10～20分钟的效果无明显差别，封闭10分钟的效果等同于或显著优于常规的封闭方法)。